離心方法的選用

　　離心方法的選用

　　所分離的顆粒大小和密度相差較大:常速、高速離心;若從樣品液中分離2種以上大小和密度不同的顆粒：差速離心;超速離心:差速離心法和密度梯度離心法，后者又分速率區(qū)帶離心和等密度離心。

　　1、 差速離心

　　采用不同離心速度與時(shí)間，使不同沉降速度的顆粒分批分離;

　　差速離心法：

　　原理：采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的離心時(shí)間下分批分離的方法，稱為差速離心法。

　　當(dāng)以一定離心力在一定的離心時(shí)間內(nèi)進(jìn)行離心時(shí)，在離心管底部就會(huì)得到最大和最重顆粒的沉淀，分出的上清液在加上轉(zhuǎn)速下再進(jìn)行離心，又得到第二部分較大、較重顆粒的“沉淀”及含小和輕顆�！吧锨逡骸保�如此，多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較好分開。這時(shí)所得沉淀是不純的，需經(jīng)再懸浮和再離心(2—3次)，才能得到較純顆粒。

　　常用于從組織勻漿中分離細(xì)胞和病毒。

　　2、 密度梯度離心

　　又稱速率—區(qū)帶離心,沉降系數(shù)較接近的物質(zhì)分離的方法;

　　原理：不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。

　　介質(zhì)梯度應(yīng)預(yù)先形成，介質(zhì)的最大密度要小于所有樣品顆粒的密度。常用的有蔗糖、甘油;

　　密度梯度液的制備用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度;

　　操作：離心前將樣品小心鋪放在密度梯度溶液表面，離心形成區(qū)帶。離心后不同大小、不同形狀、有一定沉降系數(shù)差異的顆粒在密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶;

　　可用來分離核酸、蛋白質(zhì)、核糖體亞基及其它成分。

　　3、 等密度離心

　　原理：當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在離心力場下，在密度梯度介質(zhì)中，顆�；蛳蛳鲁两�，或向上浮起，一直移動(dòng)到與它們各自的密度恰好相等的位置上形成區(qū)帶，從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離;

　　區(qū)別:離心介質(zhì)、密度梯度范圍與密度梯度離心不同，欲分離的顆粒密度處于離心介質(zhì)密度范圍內(nèi)。

　　介質(zhì)有：氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。

　　操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時(shí)間離心。

　　介質(zhì)梯度不需預(yù)先制備，離心時(shí)把密度均一的介質(zhì)液和樣品混合后裝入離心管，通過離心形成梯度，讓顆粒在梯度中進(jìn)行再分配。常用來分離提取核酸、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒。