葉綠素的定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)

　　實(shí)驗(yàn)方法原理：根據(jù)葉綠素對(duì)可見(jiàn)光的吸收光譜，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)下測(cè)定其光密度，而后用公式計(jì)算出葉綠素含量，此法精確度高，且能在未經(jīng)分離的情況下分別測(cè)出葉綠素a、b的含量。

　　根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的光密度D與其濃度C及液層厚度L成正比，即：

D＝kCL　k為比例常數(shù)，當(dāng)溶液濃度以重量百分濃度為單位，液層厚度為1厘米時(shí)，k稱(chēng)為該物質(zhì)的比吸收系數(shù)。

　　如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此溶液在某一波長(zhǎng)下的總光密度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下光密度的總和，這就是光密度的加和性。

　　葉綠素a、b在紅光區(qū)的最大吸收峰分別位于663nm 和645nm，在波長(zhǎng)663nm下，葉綠素a、b的80％丙酮溶液的比吸收系數(shù)分別為82.04和9.27，在波長(zhǎng)645nm下分別為16.75和45.6，可據(jù)此得葉綠素總量CT。

　　另外，由于葉綠素a、b在652nm處有相同的比吸收系數(shù)（均為34.5），也可在此波長(zhǎng)下測(cè)定一次消光度（D652）而求出葉綠素a、b的總量。

　　儀器、耗材：新鮮葉片丙酮研缽漏斗天平剪刀燒杯濾紙量筒分光光度計(jì)

　　實(shí)驗(yàn)步驟：稱(chēng)取新鮮葉片0.5克，剪碎置研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂，并加入2-3 ml  80％丙酮，研成勻漿，再加入10ml80％丙酮，繼續(xù)研磨充分，用一層加丙酮濕潤(rùn)過(guò)的濾紙過(guò)濾，再用少量丙酮將濾紙和研缽上的色素沖洗干凈，定容至25ml容量瓶中，搖勻。

　　吸取葉綠素丙酮提取液2ml，加80%丙酮2ml稀釋后，倒入1cm比色杯中，用分光光度計(jì)分別在波長(zhǎng)645nm、663nm和652nm下測(cè)定光密度，以80％丙酮為空白對(duì)照。