樣品制備技術(shù)不過硬 電鏡儀器再好也沒用

　　“2015全國生物醫(yī)學(xué)農(nóng)林電鏡技術(shù)研討會暨生物電鏡前沿技術(shù)培訓(xùn)班”在浙江大學(xué)舉行。本次會議特別邀請了國內(nèi)外知名專家教授和電鏡工作者講授生物電子顯微鏡技術(shù)的最新發(fā)展，交流生物樣品制備和應(yīng)用方面的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，并安排部分學(xué)員參加實(shí)驗(yàn)操作及演示。

　　第二軍醫(yī)大學(xué)楊勇驥教授在研討會上做了題為“常規(guī)生物電鏡樣品制備”的報告,介紹了自己對于常規(guī)電鏡制樣技術(shù)的理解及應(yīng)用心得。

　　楊勇驥表示：“電鏡技術(shù)是目前形態(tài)學(xué)分析的最高層次，電鏡的最終目標(biāo)就是獲得完美的照片。現(xiàn)今社會科研競爭十分激烈，生物電鏡技術(shù)是理工醫(yī)綜合性最強(qiáng)、精細(xì)程度最高的應(yīng)用技術(shù)之一，是能夠真正體驗(yàn)到‘細(xì)節(jié)’決定成敗的一種特殊的技術(shù)方法。而生物電鏡又是一個不出活的技術(shù)，因此必須要在電鏡工作中刻苦鉆研，才能有所成就。”

　　楊勇驥強(qiáng)調(diào)說，要想得到完美的電鏡照片，必須要有過硬的生物電鏡樣品制備技術(shù)，否則哪怕是采用最高精尖的電鏡也得不到理想的結(jié)果。報告中楊勇驥比較了自己實(shí)驗(yàn)室里一臺使用了30年的電鏡和2009年采購的新型電鏡對同樣的樣品的觀察結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用了30年的電鏡由于制樣好，觀察結(jié)果反而更好。

　　生物樣品常規(guī)電鏡制樣包括：樣品取材、固定、脫水、浸透、包埋、修快、定位、超薄切片、電子染色等步驟。楊勇驥指出這么多環(huán)節(jié)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)一點(diǎn)問題，整個制樣就失敗了。報告中他詳細(xì)的介紹了各個環(huán)節(jié)應(yīng)該注意的要點(diǎn)，以及易犯的錯誤。

　　從楊勇驥的介紹中，我們體會到了生物電鏡制樣的要求是多么精細(xì)。就單拿超薄切片這一個步驟來說，要想獲得理想的切片效果，首先在切片時一定要有良好的心境，甚至要在自己心情比較好的時候才能來做這項(xiàng)工作。另外切片時要確保沒有人打擾，還要避免對切片機(jī)大聲咳嗽、打噴嚏等。切片的環(huán)境不能過于潮濕，否則會引起震顫。要選擇合適的切片速度。撈片時要選擇潔凈的、未氧化的、親水性良好的載網(wǎng)才能撈起完整的切片，所用載網(wǎng)如果放了幾天，已經(jīng)被氧化，就不要用來撈片了，同時注意用載網(wǎng)的正面撈片。另外，還有確保玻璃刀或鉆石刀的刀口平整。

　　最終理想的超薄切片應(yīng)該是厚薄均一、無空洞、無震顫、無皺褶、無雜質(zhì)污染的連續(xù)切片，而且除了切片這個環(huán)節(jié)，前期的取材、脫水、浸透、包埋、修快、定位與后期的染色等對切片效果的影響是環(huán)環(huán)相扣。

　　最后，楊勇驥說道：“生物電鏡制樣技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)技術(shù)中最精細(xì)、最繁復(fù)的技術(shù)之一。生物電鏡工作者沒有教授與技術(shù)員之分，只有不斷實(shí)踐摸索技術(shù)，精心總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，才能掌握這門技術(shù)的精髓，才能配合使用電鏡獲得理想精美的超微結(jié)構(gòu)圖像。”