厭氧菌的培養(yǎng)方法

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實際情況選用。

1．厭氧缸法。接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。

2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內(nèi)在半小時內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達厭氧狀態(tài)，可以孵育。

3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今為止國際上公認的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內(nèi)進行操作，故名。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關(guān)上外門進行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài)，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究，大量培養(yǎng)基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié)。

4.厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。

5.生物耗氧法：在一密閉的容器內(nèi)放以生物（多是植物），消耗氧氣，同時產(chǎn)生二氧化碳，供細菌生長用。

6.焦性末食子酸法：在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙，均勻撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面，用融化的白蠟封邊，造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應(yīng)后耗氧。該法用于厭氧不嚴格的厭氧菌的培養(yǎng)，簡單。如有梭狀芽孢桿菌。

7.皰肉培養(yǎng)基：本身就是一個不需特殊設(shè)備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管，液面封凡士林，造成無氧環(huán)境。